Illumina miRNA Prep – uproszczony i precyzyjny sposób przygotowania bibliotek małych RNA
Analiza miRNA i innych małych RNA dostarcza cennych informacji o regulacji ekspresji genów, mechanizmach chorób i potencjalnych biomarkerach. Jednak skuteczne przygotowanie bibliotek do sekwencjonowania wciąż stanowi wyzwanie – szczególnie w przypadku niewielkich ilości RNA i potrzeby ograniczenia artefaktów technicznych.
Illumina miRNA Prep to nowe rozwiązanie, które upraszcza proces przygotowania bibliotek małych RNA z całkowitego RNA lub wyizolowanego miRNA, niezależnie od gatunku. Oparte na zoptymalizowanej procedurze, pozwala uzyskać wysokiej jakości biblioteki NGS w ciągu jednego dnia – bez konieczności oczyszczania żelowego.
Kluczowe elementy metody obejmują:
- Zoptymalizowaną ligację adapterów, która selektywnie wychwytuje dojrzałe cząsteczki miRNA przy użyciu specjalnie zaprojektowanych adapterów 3′ i 5′.
- Oczyszczanie oparte na kulkach magnetycznych, zastępujące clean-up na przy użyciu żelu – pozwala skrócić czas pracy i zmniejszyć ryzyko utraty materiału.
- Ograniczenie powstawania dimerów adapterów dzięki zastosowaniu zmodyfikowanych oligonukleotydów, co zwiększa liczbę rzeczywistych odczytów miRNA w sekwencjonowaniu.
- Wykorzystanie unikalnych znaczników molekularnych (UMI), które umożliwiają dokładne zliczanie pojedynczych cząsteczek i eliminację błędów wynikających z amplifikacji PCR.
Illumina miRNA Prep zapewnia wiarygodną, ilościową analizę ekspresji miRNA, również w próbkach o ograniczonej ilości materiału. Całą procedurę – od oczyszczonego RNA do gotowej biblioteki – można przeprowadzić w mniej niż jeden dzień, z minimalnym nakładem pracy manualnej. Jest to praktyczne, dobrze przemyślane rozwiązanie dla laboratoriów badawczych, które chcą uzyskać bardziej powtarzalne i wiarygodne dane z analiz małych RNA.